產(chǎn)品描述

Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是為 illumina 平臺設(shè)計的 DNA 文庫準(zhǔn)備試劑盒,適用于起始量 1 ng-200 ng 的 DNA 樣本，試劑盒經(jīng)過精心設(shè)計和優(yōu)化，能夠快速構(gòu)建文庫(2.5-3.5小時)，有高效的文庫轉(zhuǎn)化率與擴(kuò)增效率，已經(jīng)經(jīng)過多樣本驗證可獲得優(yōu)異的文庫與測序數(shù)據(jù)，可用于石蠟包埋組織 DNA 樣本建庫。試劑盒包含了 DNA 片段化和末端修復(fù)加 A尾的預(yù)混液、連接預(yù)混液、高保真擴(kuò)增預(yù)混液、短接頭和含有 INDEX 的 PCR 引物(可以根據(jù)客戶要求進(jìn)行選配)。

(注意: 本試劑盒不可直接用不帶 INDEX 的引物進(jìn)行 PCR 反應(yīng))。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品組分

一、關(guān)于操作

1. 請穿實驗服并戴一次性手套進(jìn)行實驗。

2. 使用前請將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。

3. 混勻時請輕輕吹打或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會造成文庫產(chǎn)出下降。

4. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的一次性槍頭。

5. 推薦在帶熱蓋的 PCR 儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱 PCR 儀至反應(yīng)溫度附近請在潔凈的實驗環(huán)境下實驗，避免污染。

二、TLX Adapter for ILM說明

1. TLX Adapter for ILM 采用短接頭模式。

2. 接頭濃度: 15 uM；直接用于相應(yīng)建庫試劑盒連接體系里即可。

3. -20°C保存，使用前提前融化，盡量低溫融化，避免在超過 30°的環(huán)境中融化。

4. 建庫推薦使用量: 常規(guī) DNA投入量 100-200 ng,2uL/rxns; 其他 DNA 投入量需要適當(dāng)調(diào)整接頭使用量。

三、關(guān)于磁珠純化與分選

1. DNA 片段選擇步驟可在接頭連接后或文庫擴(kuò)增后進(jìn)行。

2. 當(dāng)Input DNA質(zhì)量> 50 ng，建議在接頭連接后分選；如Input DNA 質(zhì)量 <50 ng，可在文庫擴(kuò)增后進(jìn)行分選。

3. TLX Ligase Buffer 包含高濃度的 PEG，對雙輪磁珠分選產(chǎn)生顯著影響。因此，當(dāng)在接頭連接后進(jìn)行片段選擇，須先進(jìn)行純化步驟，再進(jìn)行雙輪分選步驟，如在文庫擴(kuò)增后進(jìn)行片段選擇，可直接進(jìn)行雙輪磁珠分選步驟。

4. 磁珠使用前應(yīng)先平衡至室溫，并混勻再使用，否則會導(dǎo)致得率下降。

5. 80%乙醇應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。

6. 6進(jìn)行片段選擇時，初始樣品體積應(yīng)盡量> 100 uL，初始樣本體積越大，片段選擇效果越好。

四、關(guān)于文庫擴(kuò)增

文庫擴(kuò)增循環(huán)數(shù)與文庫產(chǎn)量和文庫質(zhì)量有直接關(guān)系，請參照下表列舉的本試劑盒設(shè)置擴(kuò)增 循環(huán)數(shù)，并摸索合適的循環(huán)數(shù)。

五、關(guān)于文庫質(zhì)檢

1. 通常情況下，構(gòu)建好的文庫可通過長度分布檢測和濃度檢測來進(jìn)行質(zhì)量評價。

2. 文庫濃度檢測可使用：基于雙鏈 DNA熒光染料的方法，如Qubit或 gPCR 絕對定量的方法。

3. 文庫長度分布檢測，可通過 Agilent Bioanalvzer 2100 等基于毛細(xì)管電泳或微控流原理的設(shè)備進(jìn)行檢測。

NGS 0602-96 MICH TLX DNA-seq kit (ILM Compatible).pdf